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 抗原的制備方法

自然界的許多物質(zhì)都可以作為抗原，但用作診斷試劑的抗原必須是單一特異性的，即純化的抗原，所以必須將所需的抗原從復(fù)雜的組分中提取出來(lái)，下面介紹一些主要的制備方法。

顆粒性抗原的制備

顆粒性抗原主要指細(xì)胞抗原或細(xì)菌抗原，zui常用的細(xì)胞抗原是制備溶血素用的綿羊紅細(xì)胞。它的制備方法比較簡(jiǎn)單，采用新鮮綿羊紅細(xì)胞，以無(wú)菌鹽水洗滌3次，zui后配成106個(gè)/mL濃度的細(xì)胞懸液即可。細(xì)菌抗原多用液體或固體培養(yǎng)物經(jīng)過(guò)集菌后處理制得。有些蟲卵、細(xì)胞膜成分都可制成顆?？乖ｎw?？乖嗜闈嵋?，多采用靜脈內(nèi)免疫法，較少采用佐劑作皮內(nèi)注射。

可溶性抗原主要包括蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、細(xì)菌毒素、酶、補(bǔ)體等。但是這些蛋白的成分比較復(fù)雜，免疫前需要純化，常用的純化過(guò)程按以下步驟進(jìn)行。

（1）組織和細(xì)胞粗抗原的制備   將新鮮或超低溫保存的樣品組織清洗干凈后，剪成小塊后進(jìn)行粉碎，常用的粉碎方法有高速組織搗碎機(jī)法和研磨法，粉碎后的組織勻漿液離心后上清液中就含有可提取可溶性抗原的材料――粗抗原。

（2）組織細(xì)胞可溶性抗原的制備   可用于制備抗原用的細(xì)胞包括正常細(xì)胞、病理細(xì)胞或傳代細(xì)胞。制備抗原時(shí)需將細(xì)胞破碎后釋放出抗原。制備方法有反復(fù)凍融法、冷熱交替法、超聲破碎法、自溶法、溶菌酶處理法等。

（3）超速離心和梯度密度離心法   超速離心是分離亞細(xì)胞部分及蛋白質(zhì)大分子是有效手段，它又分為差速離心和梯度離心。離心純化抗原的方法是依據(jù)抗原的比重特點(diǎn)進(jìn)行分離，目前僅適用于少部分大分子抗原，如IgM、C19、甲狀腺蛋白等；對(duì)于大量的中、小分子量蛋白質(zhì)，多不適合用離心的方法進(jìn)行分離純化。

    （4）選擇性沉淀法  選擇性沉淀是采用各種沉淀劑或改變某些條件促使抗原成分沉淀，從而達(dá)到純化的目的，主要包括鹽析沉淀法、有機(jī)溶劑沉淀法、水溶性非離子型聚合物沉淀法等。

     （5）親和色譜、凝膠過(guò)濾和離子交換色譜   采用各種色譜手段，可將某種蛋白質(zhì)從復(fù)雜組分中純化出來(lái)。

   （6）純化抗原的鑒定  常用的方法有聚丙烯胺凝膠電泳法、結(jié)晶法、免疫電泳法、免疫雙擴(kuò)散法等。一般常把幾種方法聯(lián)合使用才能判斷出可靠的結(jié)果。