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氯霉素
快速檢測(cè)試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物氯霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗氯霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物氯霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物氯霉素的含量。
二、試劑盒特性
組織、蜂蜜、牛奶···································· 0.1ppb
奶粉、蛋類、尿樣、飼料··························· 0.15ppb
氯霉素 ·············································· 100%
甲砜霉素 ········································· < 0.1%
氟甲砜霉素 ······································ < 0.1%
組織、蛋類、奶粉····························· 85%±20%
蜂蜜、牛奶、飼料····························· 93%±25%
尿樣·········································· 100%±25%
三、試劑盒組成
1 | 微量測(cè)試孔 | 每條8孔,一板12條 | |
2 | 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶 (1ml/瓶) | 0ppb | 0.02ppb |
0.06ppb | 0.18ppb | ||
0.54ppb | 1.62ppb | ||
3 | 酶標(biāo)記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍(lán)色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 2X濃縮復(fù)溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱
微量移液器:?jiǎn)蔚?/span> 20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl
試 劑:乙酸乙酯、正己烷
五、樣本前處理步驟
(a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。
(b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
配液1 樣本復(fù)溶液:
將2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按1:1稀釋。
(a)肌肉組織樣本處理方法
樣本稀釋倍數(shù): 0.5倍
此方法無(wú)法檢測(cè)肝臟類樣本,處理時(shí)易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,影響檢測(cè)結(jié)果(乳化時(shí)建議處理方法:去除上層有機(jī)相再加入2ml正己烷混合30s,室溫4000r/min以上離心10min;去除上層有機(jī)相)。
(b)蜂蜜處理方法
樣本稀釋倍數(shù): 0.5倍
(c)牛奶、奶粉、蛋類樣本處理方法
樣本稀釋倍數(shù): 1倍
處理時(shí)如無(wú)法取到3ml上層液體,可以重復(fù)離心后再取液,或加入10ml乙酸乙酯后取5ml吹干,稀釋倍數(shù)不變。
(d)尿樣、飼料樣本處理方法
樣本稀釋倍數(shù): 2倍
六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氯霉素量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為2.143; 0.02ppb為1.816;0.06ppb為1.415;0.18ppb為0.74;0.54ppb為0.313;1.62ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是0.54ppb~1.62ppb;樣本2的濃度范圍是0.06ppb~0.18ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實(shí)際濃度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以di一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光率(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎索?。?/span>
八、 注意事項(xiàng)
九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期
提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。