您好,歡迎來到上海研謹(jǐn)生物科技有限公司!
13585717991
021-65232515
土霉素酶聯(lián)免疫試劑盒說明書
一、藥物概述及檢測原理
歐盟第675/92號令中初步規(guī)定在肌肉及牛奶中的四環(huán)素族化合物的總量不得超過100ppb,在腎臟,肝臟及雞蛋中分別不得超過600 ppb,300 ppb及200ppb。
本公司的土霉素酶聯(lián)免疫試劑盒使用全新一代生物技術(shù)開發(fā),具有方便、快速、靈敏等特點(diǎn)。
本試劑盒利用土霉素抗體與土霉素可產(chǎn)生特異性結(jié)合的性質(zhì),先在酶標(biāo)板上預(yù)包被抗原,再加入標(biāo)準(zhǔn)品(樣本)和土霉素抗體,樣本土霉素藥物與固定在酶標(biāo)板上的抗原競爭土霉素抗體,最后加入底物催化顯色。此時(shí)顯色深度與標(biāo)準(zhǔn)品(樣本)中土霉素藥物的含量成反比。
二、試劑盒內(nèi)包含組分:
v 10×標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液:0 ppb、4ppb、12 ppb、36 ppb、108 ppb,0.5mL/瓶。
v 96孔酶標(biāo)板:1塊
v 土霉素抗體工作液:1瓶(7mL/瓶)
v 酶標(biāo)二抗工作液:1瓶(7mL/瓶)
v 20×濃縮洗滌液:1瓶(30 mL/瓶)
v 20×濃縮復(fù)溶液:1瓶(10 mL/瓶)
v 底物A液:1瓶(7 mL/瓶)
v 底物B液:1瓶(7 mL/瓶)
v 終止液:1瓶(7mL)
v 說明書
v 蓋板膜
三、用戶需要自備的設(shè)備和試劑
儀器:
v 酶標(biāo)儀(檢測波長450 nm、630 nm)
v 電子天平(精度:0.01 g)
v 離心機(jī)(4000 g及以上)
v 生化培養(yǎng)箱(可調(diào)25℃、37℃、60℃)
v 旋渦振蕩器
v 微量移液器:(20μl-200μl、100μl-1000μl各一支、30-300ul八道排槍)
v 計(jì)時(shí)器
試劑:(試劑均為分析純)
v 去離子水
四、試劑盒特異性
試劑盒與其他藥物的交叉反應(yīng)率:
v 土霉素…………………………100%
v 金霉素…………………………240%
v 四環(huán)素…………………………200%
v 強(qiáng)力霉素(多西環(huán)素)……………………20%
五、樣本檢測步驟
1. 工作液準(zhǔn)備
v 復(fù)溶工作液:取1份20×濃縮復(fù)溶液加去離子水19份按照1:19的比例稀釋即得。
v 洗滌工作液:取1份20×濃縮洗滌液加去離子水19份按照1:19的比例稀釋即得。
v 1 M鹽酸溶液:量取1ml濃鹽酸加去離子水11ml溶解混勻即得。
2. 樣品前處理
組織樣本(稀釋倍數(shù):12)
? 準(zhǔn)確稱取1±0.01 g均質(zhì)后的組織樣品于10 mL離心管中;
? 加入5 mL去離子水,劇烈渦動(dòng)2min;
? 4000 g以上,離心10 min;
? 取500ul上清液加入500ul復(fù)溶工作液(見5.1)中,渦動(dòng)10min;
? 取50ul進(jìn)行檢測。
蜂蜜樣本(稀釋倍數(shù):10)
? 精確稱取1±0.01g蜂蜜樣品于10mL離心管中;
? 加入2mL去離子水,充分渦動(dòng)1 min溶解分散;
? 取100ul溶解液加入400ul復(fù)溶工作液中,渦動(dòng)1 0S混勻;
? 立即取50ul進(jìn)行檢測。
液態(tài)奶樣本方法一(稀釋倍數(shù):10)(同卡那霉素液態(tài)奶方法一致)
? 將采樣好的液態(tài)奶樣本解凍后于室溫靜置平衡30min以上;
? 將槍頭伸入原奶樣本下層,小心取出1ml樣本加入2ml離心管中(注意:盡量不要取到上層的奶油);
? 加入50μL 1M鹽酸(見5.1),強(qiáng)烈震搖1min (或使用渦動(dòng)儀渦動(dòng)30s);
? 使用離心機(jī)室溫4000 g以上離心10 min;
? 取上層清亮液體50μL加入另一干凈離心管中(注意:盡量不要取到最上層的奶油),再加入450μL復(fù)溶工作液,強(qiáng)烈震搖1min (或使用渦動(dòng)儀渦動(dòng)30s);
? 取50 μL液體進(jìn)行分析。
液態(tài)奶樣本方法二(稀釋倍數(shù):40)(同卡那霉素液態(tài)奶方法一致)
? 精確量取50ul液態(tài)奶樣品于1950ul復(fù)溶工作液中;
? 充分渦動(dòng)1 min混勻;
? 立即取50ul進(jìn)行檢測。
飼料(牛飼料、豬飼料)(稀釋系數(shù):200 )
? 準(zhǔn)確稱取 1±0.01 g 飼料樣品于 50mL 離心管中;
? 加入 5 mL 去離子水,充分渦動(dòng) 2min 至飼料*分散;
? 4000 g 以上,離心 10 min;
? 取40 μL上清液于新的離心管中,加入1560μL 復(fù)溶工作液 ,充分渦動(dòng) 30 s;
? 立即取 50μL 進(jìn)行檢測。
3. 檢測
? 準(zhǔn)備:將要使用的酶標(biāo)板條插入酶標(biāo)板架上,并記錄各標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,為減小檢測值波動(dòng)建議做雙孔平行實(shí)驗(yàn)(每個(gè)樣本/標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)兩孔),未使用的酶標(biāo)板條用自封袋密封后,保存于2-8℃環(huán)境中以防變質(zhì);
? 標(biāo)準(zhǔn)品工作液配制:分別取5個(gè)2ml離心管,標(biāo)記為0、0.4、1.2、3.6、10.8ppb;于每個(gè)管中加入900ul復(fù)溶工作液,于對應(yīng)管中加入100ul10×標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液(0—0、0.4—4、1.2—12、3.6—36、10.8—108);
? 加樣:向?qū)?yīng)微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品工作液/樣品溶液50 μL,再向每孔中加入50 μL酶標(biāo)二抗工作液,再向每孔中加入50 μL抗體工作液;
? 孵育:輕輕振蕩酶標(biāo)板10 s,使孔內(nèi)液體充分混勻后,蓋好蓋板膜于25℃避光反應(yīng)30 min;
? 洗滌:取出酶標(biāo)板后小心揭開蓋板膜,倒出板孔中液體后,在每孔加 250 μL洗滌工作液,浸泡15-30s后倒掉洗滌工作液,然后再加入洗滌工作液重復(fù)洗滌3~4次后,將酶標(biāo)板倒置于吸水紙上,用力拍干;
? 顯色:在每孔中加入100 μL 底物A和底物B的混合液(注:底物A液、底物B液必須按體積1:1充分混合,混合液在10 min內(nèi)使用,切不可使用金屬容器盛裝、攪拌試劑以免底物變質(zhì)失效);
? 孵育:輕輕振蕩酶標(biāo)板10 s,使孔內(nèi)液體充分混勻后,蓋好蓋板膜于25℃避光反應(yīng)15 min;
? 終止:在反應(yīng)后的微孔中加入終止液50μL/孔,底物液由藍(lán)變黃表明終止成功。
? 讀數(shù):終止后的酶標(biāo)板應(yīng)在5 min內(nèi)用酶標(biāo)儀讀數(shù),建議使用450 nm、630 nm雙波長讀取酶標(biāo)板吸光度值。
4. 計(jì)算結(jié)果
? 設(shè)各標(biāo)準(zhǔn)品(或樣品)的吸光度平均值為B,零標(biāo)準(zhǔn)(濃度為0 ppb的標(biāo)準(zhǔn)品)吸光度平均值B0以(B/B0)×100%為各標(biāo)準(zhǔn)品(或樣品)對應(yīng)的吸光度的百分比:
? 使用半對數(shù)系統(tǒng)代入標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的吸光度的百分比,與標(biāo)準(zhǔn)品濃度擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
? 將待檢樣品吸光度的百分比代入擬合出的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中,即可得出樣品對應(yīng)的濃度,最后乘以樣品相應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中檢測物含量。
六、試劑盒參數(shù)
? 試劑盒靈敏度:0.4 ppb;
? 標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍:0.4 ppb-10.8ppb;
? 板內(nèi)變異系數(shù):<5%;
? 板間變異系數(shù):<15%;
? B0吸光度最佳值:>0.8;
? 回收率:90%±15%
? 樣品最低檢測限:
組織……………………………約12ppb
蜂蜜……………………………約20ppb
液態(tài)奶樣本方法一……………約20ppb
液態(tài)奶樣本方法二……………約40ppb
飼料……………………………約600ppb
注:ppb=ng/mL或ng/g。
七、分析限制
本試劑盒為定量或半定量試劑盒,建議用于大量樣本篩查分析。若檢測結(jié)果為陽性,建議使用儀器方法開展確證實(shí)驗(yàn)(如GC/MS、LC-MS/MS等)。
八、試劑盒貯存條件
? 試劑盒最佳貯存溫度為2-8℃,切勿凍存。
? 未使用完的酶標(biāo)板須密封保存2-8℃的環(huán)境中。
九、注意事項(xiàng)
? 使用試劑盒前,請務(wù)必仔細(xì)閱讀說明書。
? 試劑盒使用前,需將盒內(nèi)各組份置于實(shí)驗(yàn)臺上回溫至室溫(25±2℃)(提示:約1 h)。
? 試劑使用前需搖勻,混合時(shí)應(yīng)避免出現(xiàn)氣泡。
? 槍頭為一次性用品,為防止試劑交叉污染,檢測過程中所用槍頭不得重復(fù)使用。
? 請勿使用過期試劑盒,不同批號試劑盒中的試劑不得混用。
? 樣品處理完畢后請立即分析,否則可能影響檢測結(jié)果。
? 底物A液、底物B液均為無色透明液體,若在使用前已變成藍(lán)色,或混合后立即變藍(lán),說明試劑已污染或變質(zhì)。
? 加樣過程在保證精度的前提下一定要迅速,以免反應(yīng)時(shí)間差對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。
? 終止液中含有硫酸,若不小心濺上皮膚或衣物請立即用大量清水沖洗。若不慎入眼,請?jiān)?清洗后去醫(yī)院檢查。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):
|
| ||