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土壤酸性磷酸酶 (S-ACP) 活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
更新時(shí)間:2023-10-12 點(diǎn)擊量:582

壤酸性磷酸酶 (S-ACP) 活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

量法

:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容

試劑一:液體 42mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存。用前加 100mL 蒸餾水充分溶解。試劑三:液體 2.5mL×1 瓶,4 保存。

試劑四:粉劑×1 支,4℃避光保存。臨用前加 576μL 無(wú)水乙醇 (自備) ,24 μL 蒸餾水充溶解。 (變褐色后不能再使用)

標(biāo)準(zhǔn)品:液體 1mL×1 支,0.5 μmol/mL 苯酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明

土壤酸酶是一類催化土壤有機(jī)磷礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn) 化及其生物有效性,是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有 效磷量和 pH 顯著影響,根據(jù)最適 pH 范圍,通常分為酸性、中性和堿性三種類型。

環(huán)境中,S-ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉,通過(guò)測(cè)定酚的生成量即可計(jì)算  S-ACP 活性。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:

可見(jiàn)光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、 可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

作步驟:

、粗酶液提?。?/span>

稱取風(fēng)干混勻土壤約 0.1g ,加入 0.05mL 甲苯 (自備) ,輕搖 15min ;加 0.4 mL 試劑一并且搖勻

后,置于 37溫培養(yǎng)箱,開(kāi)始計(jì)時(shí),催化反應(yīng) 24h;到時(shí)后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻, 以終 止酶催化的反應(yīng)。10000rpm 室溫離心 10min ,取上清液置于冰上待測(cè)。

、測(cè)定步驟:

a.  分光光度計(jì)/標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm ,蒸餾水調(diào)零。

b.  空白管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 10 μL 蒸餾水,20 μL 試劑三,4 μL 試劑四,充分混勻, 顯色后再加蒸餾水 166μL ,混勻后室溫靜置 30 min ,于 660 nm 測(cè)定吸光度,記為 A 空白管。

c.  標(biāo)準(zhǔn)管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 10 μL 標(biāo)準(zhǔn)液,20 μL 試劑三,4 μL 試劑四,充分混勻, 顯色后再加蒸餾水 166μL ,混勻后室溫靜置 30 min ,于 660 nm 測(cè)定吸光度,記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

d.  測(cè)定管:取微量玻璃比色皿/96 板,加入 10 μL 上清液,20 μL 試劑三,4 μL 試劑四,充分混勻, 顯色后再加蒸餾水 166μL ,混勻后室溫靜置 30 min ,于 660 nm 測(cè)定吸光度,記為 A 測(cè)定管。


產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用!請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途!


:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。

三、S-ACP 活性計(jì)算:

活性位定義:37℃中每克土壤每天釋放 1nmol 酚為 1 個(gè)酶活單位。

S-ACP  ( nmol/d/g) = [C 標(biāo)準(zhǔn)液× (A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]×V ÷W÷T =725×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管W

C 標(biāo)準(zhǔn)液:0.5 μ mol/mL;  V 總:催化體系總體積,1.45mLW :土壤樣品質(zhì)量,g;T:催化反 應(yīng)時(shí)間,24 h=1 d。

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