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口蹄疫病毒O型(FMDV-O)競爭ELISA抗體檢測試劑盒說明書
更新時間:2024-07-19 點擊量:777

口蹄疫病毒O型(FMDV-O)競爭ELISA抗體檢測試劑盒說明書

【產品名稱】

中文名稱口蹄疫病毒O型(FMDV-O)競爭ELISAC-ELISA)抗體檢測試劑盒

英文名稱Competitive ELISA Kit for Detecting Antibody of Foot and Mouth Disease Virus type O

簡介

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的急性、熱性高度接觸性傳染病,主要侵害偶蹄獸,一旦發(fā)病,將會引起嚴重的經濟損失。FMDV屬于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒屬,目前已知共有7中血清型,即O型、A型、C型、SAT1、SAT2、SAT3和亞洲1型。

FMDV感染或免疫后,產生抗體的主要中和表位在VP1蛋白,本試劑盒基于VP1蛋白,采用競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(C-ELISA),配備全套診斷試劑和材料,可用于檢測豬、牛、羊等動物血清或血漿中的O型口蹄疫病毒(FMDV-O)抗體,適用于動物疫苗免疫抗體的定性檢測及動物群體抗FMDV-O感染風險能力的評估。試劑盒具有敏感性高、特異性強、穩(wěn)定性好、操作簡便快捷的特點。

檢測原理】

本試劑盒采用競爭ELISA法,在酶標板上預先包被FMDV-O VP1重組蛋白作抗原,以針對VP1蛋白的表位型特異單抗作中和競爭抗體(即酶標記物)。實驗時,加入待檢血清和單抗酶標記物,則待檢血清種等FMDV-O特異性抗體與酶標記物競爭結合包被在酶標板上的FMDV-O VP1重組蛋白。通過洗滌除去未結合的抗體和其他成分,加入底物顯色。用酶標儀450nm波長測定反應物的OD值,判定實驗結果。

試劑盒組分

序號

組分名稱

數量

標識

1

FMDV-O 抗原包被板

96T×2

鋁箔袋

2

FMDV-O 酶標記物

12 mL

黃色

3

FMDV-O 性對照血清

1.5 mL

紅色帽

4

FMDV-O 陰性對照血清

1.5 mL

綠色帽

5

樣本稀釋液

12 mL

透明

6

10×濃縮洗滌液

50 mL

白色帽

7

顯色劑

12 mL×2

色帽

8

終止液

12 mL

色帽

9

蓋板膜

2

10

說明書

1

樣本要求

盡量使用新鮮采集的血清樣品不能用于檢測嚴重污染或嚴重溶血的樣品;如果血清樣本渾濁,需離心后取上清進行檢測;檢測樣品可在2~8保存5天,長時間保存需要轉移至-20或更低溫環(huán)境中。

【實驗準備】

1試劑盒組分回溫平衡:試劑盒所有組分在使用前取出,置恒溫箱(25±3℃)中至少30 min,恢復至室溫。

2配制洗滌液將試劑盒提供濃縮洗滌液用去離子水稀釋10(如:10 mL 10×濃縮洗滌液+90 mL去離子水)。

操作方法】

1加樣:按照“微孔板加樣位置示例圖"向抗原包被板樣品孔內預先加入40 µL樣本稀釋液,在對照孔內分別加入50 µL陰性對照血清(NC)50 µL陽性對照血清(PC)。然后在樣品孔中加入10 µL待檢血清,樣品稀釋比例1:5。

微孔板加樣位置示例圖


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

NC












B

NC












C

PC












D

PC












E

S1












F

S2












G

S3












H

S4












2加酶:每孔加50 μL酶標記物,輕輕混勻。樣品稀釋變?yōu)?/span>1:10,即反應體系為100 µL/孔。

3溫育輕輕振蕩混勻(勿溢出),蓋上封板膜,37℃孵育30 min。

4洗板去孔液體,每孔加300 μL洗滌液洗滌3次,最后一次洗滌后將酶標板在吸水紙上輕輕拍干,嚴禁各步驟之間孔板出現(xiàn)干燥情況。

5顯色:每孔加100 μL顯色劑,輕輕混勻,蓋上封板膜,37℃避光孵育10 min

6終止:每孔加50 μL終止液,振蕩10秒,充分混勻,終止后即讀數。

7讀數使用酶標儀測定450 nm波長處的光密度值OD值)。

【結果判定】

1.實驗成立條件:性對照平均OD0.6,性對照平均OD0.4。

2計算方法:ODNC均值=(ODNC1ODNC2)/2

3樣品S/N值計算公式:S/N樣本OD/ ODNC均值

4判定標準S/N0.5,判為S/N0.5,判為性。

【注意事項】

1儲存條件為2~8℃。試劑盒開啟前應確認其批號及有效期。

2過期產品請勿使用,不同批號的試劑盒組禁止混用。

3試劑盒使用前各組分試劑均須恢復至室溫(25±3℃),使用后放置2~8℃保存。

4.應注意避免向試劑盒中引入污染。移液器吸頭必須一次一換。

5.實驗所用儀器(如:微量移液器、恒濕培養(yǎng)箱、ELISA洗板機、酶標儀)需要在使用前進行功能檢查,確保其可用性、準確性。

6.所有試劑嚴禁接觸皮膚和粘膜。檢測結束后所用耗材需按國家規(guī)定進行無害化處理。

7.未用的微孔板條可裝入密封袋中2~8保存。

8.試劑盒中各組容器只針對該組分使用,不可二次利用。

【儲存條件及有效期】

28保存,有效期12個月。

規(guī)格96T×2/

【生產日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒。

 

僅供獸醫(yī)診斷使用

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