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加A試劑盒說明書

A-Tailing Kit

加A試劑盒

目錄號：YJ0803

保存條件：-20℃保存。

組分說明

                    Cat. No.                       YJ0803

                    Size                             20次

                    A-Tailing Enzyme（5 U/μl）         25 μl

                    10×A-Tailing Buffer             120 μl

                    dATP，2 mM                        25 μl

本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途

    產(chǎn)品簡介

    　　利用具有3’-5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶，如Pfu等進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，其PCR產(chǎn)物為不帶  A尾的平末端  DNA片段，如想將該片段克隆到     T載體上，需要先利用A-Tailing  Enzyme在平末端片段后加上A尾后才能與T載體上3’末端的T堿基互補(bǔ)連接。

    本產(chǎn)品是在平末端 DNA片段的3’末端添加一個A尾，使平末端的 DNA片段進(jìn)行TA克隆

成為可能。本試劑盒提供了加A尾需要的所有成分，可以在30分鐘完成整個過程。與平

    末端DNA片段克隆相比，TA克隆具有較高的克隆效率，可大大提高實(shí)驗成功率。

    使用方法

    1．將平末端PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化，若 PCR無非特異擴(kuò)增可用 DNA產(chǎn)物回收試劑盒進(jìn)行純化，若 PCR產(chǎn)物有非特異性擴(kuò)增可用膠回收純化試劑盒進(jìn)行純化。

    2．將以上純化好的平末端DNA片段按以下反應(yīng)體系加A尾：

                           試劑                      10 μl體系

                           平末端 DNA片段             X μl（<1 μg）

                           dATP                       1 μl 

                           10×A-Tailing Buffer        1 μl 

                           A-Tailing Enzyme           1 μl 

                           RNase-Free Water       補(bǔ)足至 10 μl 

    3．輕輕混勻后72℃孵育30 min。

       注意：加A尾的產(chǎn)物可以不需要再次純化，可直接用于連接反應(yīng)。