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人麻疹病毒 IgG(MV IgG)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：人麻疹病毒 IgG(MV IgG)酶聯(lián)免疫分析試劑盒 使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿、或相關(guān)組織液中麻疹病毒 IgG(MV IgG)的含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人麻疹病毒IgG(MVIgG)水平。用純化的人麻疹毒IgG(MV IgG)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入麻疹病毒 IgG(MV IgG)，再與 HRP 標(biāo)記的麻疹病毒 IgG(MV IgG)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo) 抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并 在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的麻疹病毒 IgG(MV IgG)呈正相關(guān)。 用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人麻疹病毒IgG(MV IgG)的含量。

試劑盒組成

標(biāo)本處理及要求

1．血清、血漿標(biāo)本可直接測定； 2．尿液、腦脊液、腹腔液：2000-3000 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘后，取上清液待測。

3．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 4．采集后盡早進(jìn)行實驗，若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作步驟

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上按序設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔，在*、第二孔中分別 加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻；再各取 100μl 分 別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻后，在第 三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉；再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中；再在第五、 第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加 到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻后從第七、 第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl， 混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（ 稀釋后各孔加樣量都為 50μl，濃度分別為180IU/L，120 IU/L，60 IU/L，30 IU/L，15 IU/L）。

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、測樣待品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣 品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，輕輕晃動混勻。

溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。

加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

溫育：操作同 3。

洗滌：操作同 5。

顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔 OD 值的），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 嚴(yán)格按說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

6．本試劑不同批號組分不得混用。

7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．底物請避光保存。

檢測范圍：

10 IU/L 200 IU/L

規(guī)格：96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月