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021-65232515
人外周血白細胞分離液實驗方法WBC1077k
(細胞培養(yǎng)及分子生物學)
【產品規(guī)格】
200ml/Kit
【產品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內容如下:
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| 名稱 | 產品編號 |
| 規(guī)格 |
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| A | 人外周血白細胞分離液 |
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| 200ml |
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| B | 樣本稀釋液(贈品) | 2010C1119 |
| 200ml |
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| C | 清洗液(贈品) |
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| 2010X1118 |
| 200ml |
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| D | 紅細胞裂解液(贈品) | NH4CL2009 |
| 100ml |
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| E | 說明書 |
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| 1 份 |
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【實驗前準備】 |
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A. 適用儀器 |
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| zui大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機 |
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B. 耗材 |
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| 產品名稱 |
| 產品貨號 |
| 產地 |
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| 15ml 離心管散裝 |
| 339650 |
| 美國 NUNC |
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| 15ml 離心管架裝 |
| 339651 |
| 美國 NUNC |
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| 50ml 離心管散裝 |
| 339652 |
| 美國 NUNC |
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| 50ml 離心管架裝 |
| 339653 |
| 美國 NUNC |
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| 無菌膠頭滴管或塑料滴管 |
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【檢驗方法】 |
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全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
首先取抗凝血,根據(jù)樣本量大小,分以下兩種情況:
情況 A:血液樣本量小于 5ml 時,實驗方法如下:
1. 取一支 15ml 離心管,先加入 5ml 分離液
2. 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上,400-500g,離心 20-30min(注:如改
變血液樣本及分離液用量,需相應調整離心力及離心時間,具體離心條件需客戶自行摸
索,以達到分離效果。)
3. 離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細胞層(一層或兩層),加入 10 ml 清洗液(產 品編號:2010X1118),混勻細胞。250g,離心 10min。重復洗滌 2-3 次,即得所需白細 胞。
4. 如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液(產品編號:NH4CL2009)裂解紅細胞,具體操
作方法詳見“紅細胞裂解液使用說明”。
情況 B:血液樣本量大于等于 5ml 時,實驗方法如下:
1. 取一支適當?shù)碾x心管,先加入與樣本等量的分離液。
2. 將血液樣本小心加于分離液之液面上,450-650g(zui大離心力可至 1000g),離心 20-30min。(注:根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液量越多,離心力越大,離心 時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到分離效果。加入血液樣本后,樣 本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二)。
3. 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 與步驟 4。
【注意事項】
1. 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得的實驗結果,zui 好在取血 2h 內進行實驗,血液存放時間越長,細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后 分離效果更差甚至不能達到分離目的。
2. 本實驗不要使用高聚合材質(如聚苯乙烯)的塑料制品,應使用無靜電、低靜電離 心管及未經堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會變成毛面,影響細胞分離效果。
3. 分離液用量大于稀釋后血液樣本時,分離效果更佳。
4. 當血液樣本粘度過高需稀釋時,*稀釋方法:將血液與樣本稀釋液(產品編號: 2010C1119)1:1 稀釋混勻備用。注:不當?shù)南♂尫椒〞档图毎寐始盎钚浴H缪簶?本經過稀釋則分離過程中需適當降低離心力和離心時間。
5. 如實驗后細胞得率或活性過低,請以尋求幫助,具體詳 見下方生產企業(yè)信息。
【儲存條件及有效期】
18-25℃保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實驗白細胞提取率及純度大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例,用戶可適當進行參考。
| 紅細胞 |
| 白細胞 |
| 血小板 |
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| (4.0-10.0)×109 |
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含量(個/L) | (4.0-5.5)×1012 | 中性粒細胞 | 淋巴細胞 | 單核細胞 | (1.0-3.0)×1011 |
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| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% |
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【相關實驗技術方案】
1. 所獲得白細胞的培養(yǎng)技術。
2. 所獲得白細胞的核酸提取技術。
3. 所獲得白細胞的鑒定方法 A.流式細胞技術 B.免疫組化技術 C.原位雜交技術
D.PCR 技術
注:上述技術方案詳情請登陸本搜索“細胞分離、
純化、擴增、鑒定及生物治療技術手冊”,并在說明書項目欄下下載使用。
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 |
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離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉速過小或離心時間過短 | 適當增減轉速 |
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離心后目的細胞存在于分離液中 | 轉速過大或離心時間過長 |
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離心后白環(huán)層彌散 | 細胞密度過大 | 調整細胞密度 |
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離心后白環(huán)層太淺或看不見 | 細胞密度過小 |
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2. 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地 區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時,恒定離 心時間,對離心轉速進行調整。
3. 本分離液依照標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產同類產品略有不同,可 能出現(xiàn)紅細胞沉降不*的情況,可以適當加大離心轉速。
注:在對離心條件進行調整時,離心轉速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達到分離效果,
離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
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