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微囊藻毒素ELISA試劑盒說明書

微囊藻毒素ELISA試劑盒說明書

產(chǎn)品型號(hào):

所屬分類:人的ELISA

產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-27

簡要描述:微囊藻毒素ELISA試劑盒--打折銷售中,請(qǐng)!

詳細(xì)說明:

微囊藻毒素ELISA試劑盒說明書

本試劑盒僅供研究使用。

1 使用目的:

本試劑盒用于各種水樣、血液中微囊藻毒素(Microcystin)殘留的定量檢測。

2 實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒采用競爭ELISA方法,在微孔板包被有微囊藻毒素(Microcystin)偶聯(lián)抗原,加入微囊藻毒素(Microcystin)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離微囊藻毒素(Microcystin)與微孔條上預(yù)包被的微囊藻毒素(Microcystin)偶聯(lián)抗原互相競爭微囊藻毒素(Microcystin)抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測,吸光值與樣品中微囊藻毒素(Microcystin)含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中微囊藻毒素(Microcystin)的含量。  

3 試劑盒組成

3.1 預(yù)包被的微囊藻毒素(Microcystin)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12×8條)。
3.2
微囊藻毒素(Microcystin)標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ug/L, 0.1ug/L,0.3ug/L,0.9ug/L,2.7 ug/L,8.1 ug/L

3.3微囊藻毒素(Microcystin)抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。
3.4
顯色液A1瓶(6ml)。
3.5
顯色液B1瓶(6ml)。
3.6
終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。
3.7
樣本稀釋液:1瓶(10×,  6ml),用于樣品稀釋用。
3.8
濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。
3.9
說明書一份。


4 需要而未提供的材料
4.1
設(shè)備
4.1.1
波長450nm酶標(biāo)儀。
4.1.2
粉碎機(jī)。

4.1.3
量筒。
4.1.4
振蕩器。
4.1.5
漏斗。
4.1.6Whatman
或相當(dāng)?shù)臑V紙。
4.1.7
微量移液器。
4.2
試劑
4.2.1
去離子水或蒸餾水。
4.2.2
甲醇。
5
貯存
5.1
試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍
5.2
未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存
6
注意事項(xiàng)
6.1
使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。
6.2
不要使用過期試劑盒。
6.3
試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時(shí)。
6.4
標(biāo)準(zhǔn)品中含有微囊藻毒素(Microcystin),使用時(shí)應(yīng)特別注意,操作時(shí)應(yīng)帶手套。
6.5
終止液中含有硫酸,使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6
不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。
6.7
不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6.8
稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
6.9
混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。
7
工作液準(zhǔn)備
7.1
微囊藻毒素(Microcystin)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ug/L, 0.1ug/L,0.3ug/L,0.9ug/L,2.7 ug/L,8.1 ug/L

7.2 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用

7.3 樣本稀釋液:備用
7.3
顯色劑:已備用,避免光線直照
7.4
反應(yīng)終止液:已備用
8 樣品處理程序(樣品在提取過程中,要嚴(yán)格按說明書操作,提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)
8.1
10g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液
8.2
強(qiáng)力振蕩3分鐘
8.3
Whatman 濾紙過濾
8.4
100µl處理后的樣品,加入400µl樣本稀釋液
8.5
50μl稀釋液進(jìn)行分析(稀釋倍數(shù)10

9
酶免分析步驟
9.1
實(shí)驗(yàn)須知
9.1.1
實(shí)驗(yàn)開始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時(shí)間約2小時(shí)。回溫至室溫(25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準(zhǔn)確度。
9.1.2
使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存
9.1.3
請(qǐng)不要改變分析程序
9.1.4
請(qǐng)使用精確的微量移液器
9.1.5
操作一旦開始,請(qǐng)不要中斷任何程序
9.1.6 ELISA
結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作
9.1.7
為避免交叉污染,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣
9.1.8
加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面
9.2
分析步驟
9.2.1
預(yù)先進(jìn)行編號(hào),標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測
9.2.2
取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3
樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液蒸餾水或去離子水稀釋
9.2.4
B0孔中加入50µl0.0 ug/L標(biāo)準(zhǔn)品溶液

9.2.5
在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液
9.2.6
在各樣品孔中加入50µl樣品溶液
9.2.7
在所有孔中加入50µl的抗微囊藻毒素(Microcystin)抗體酶結(jié)合物
9.2.8
輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。
9.3 37
℃溫浴30min (溫浴過程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)

9.3.1
甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
9.4
反應(yīng)
9.4.1
洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50µl顯色液A,再加 50µl顯色液B;輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之*混勻
9.4.2 37
℃溫浴10min
9.4.3
每孔中加入50µl終止液,混勻

9.4.4
450nm下檢測吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。
10
結(jié)果計(jì)算
10.1
定量分析
10.1.1
所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。
B—
標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0 ug/L
標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
10.1.2
以微囊藻毒素(Microcystin)濃度的對(duì)數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為微囊藻毒素(Microcystin)濃度的對(duì)數(shù)值,求得反對(duì)數(shù)即為測定液中微囊藻毒素(Microcystin)濃度Cug/L
10.1.3
由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。
10.2
半定量測定

10.1.1
目測半定量測定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。
10.1.2
儀器半定量測定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。


11 特異性
物質(zhì) 交叉反應(yīng)
微囊藻毒素(Microcystin) 100%


12 試劑盒參數(shù)
本試劑盒檢測下限為0.1 ug/L
B0
吸光度*值應(yīng)大于
1.0
試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。

用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。
13
標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)
試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ug/L ~8.1ug/L


14 分析限制
本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLCGC/MS加以確證。


 

 

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