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蛋白雙向2D-WB電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

蛋白雙向2D-WB電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

產(chǎn)品型號:

所屬分類:蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品時間:2024-08-18

簡要描述:提供商:上海研謹(jǐn)生物
服務(wù)名稱:蛋白雙向2D-WB 電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)
規(guī)格:實(shí)驗(yàn)服務(wù)
價格:500元
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。
更多實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來電詳詢!

詳細(xì)說明:


蛋白雙向2D-WB電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡介

2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)western blot結(jié)合而成的一項(xiàng)技術(shù)。一般實(shí)驗(yàn)流程 為抗原蛋白混合物先經(jīng)雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉(zhuǎn)印至支持膜上,再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術(shù)可以檢測到抗原等電點(diǎn)或分子量發(fā)生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應(yīng)用;而2D-WB結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù),可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強(qiáng)的抗原。

2D Westerm blot概述

2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)western blot結(jié)合而成的一項(xiàng)技術(shù)。一般實(shí)驗(yàn)流程 為抗原蛋白混合物先經(jīng)雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉(zhuǎn)印至支持膜上,再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術(shù)可以檢測到抗原等電點(diǎn)或分子量發(fā)生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應(yīng)用;而2D-WB結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù),可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強(qiáng)的抗原。

2D Western blot技術(shù)服務(wù)內(nèi)容

1、蛋白質(zhì)抽提與定量;

2、雙向電泳;

3、轉(zhuǎn)膜,封閉,孵育,顯示成像。

實(shí)驗(yàn)操作流程

1、第--項(xiàng)電泳(IEF) ,膠條平衡,第二項(xiàng)電泳SDS-APGE.

2、第二項(xiàng)電泳結(jié)束后,取出凝膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,轉(zhuǎn)膜方法可選擇濕法轉(zhuǎn)移和半干法轉(zhuǎn)移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

3、封閉,5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4度)。

4、-抗孵育,根據(jù)抗體說明書選擇孵育時間,常規(guī)的孵育條件是室溫1小時或4度過夜,-抗孵育后取出膜

TBST洗滌3次,每次5分鐘。

5、二抗孵育:根據(jù)一抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

6、顯影:將A、B底物按比例稀釋混臺均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進(jìn)行顯影,直到出現(xiàn)清晰的蛋白質(zhì)條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時間需綜臺考慮蛋白質(zhì)的上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時間等因素。

7、定影后,清洗膠片,晾干,標(biāo)定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

送樣須知,為了保證2D Western blot技術(shù)服務(wù)能順利進(jìn)行,樣品寄送需滿足以下要求:

1、顧客提供:組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)溶液等; -抗(可交由研謹(jǐn)公司代購)。

2、運(yùn)輸要求:干冰或液氮包裝寄送。

注:樣本應(yīng)避免各類污染和反復(fù)凍融。

2D Western blot技術(shù)服務(wù)報告內(nèi)容

1、蛋白質(zhì)定量結(jié)果及電泳上樣量;

2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結(jié)果;

3、2D Western blot完整的實(shí)驗(yàn)報告,包括實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器和試劑等。

附: 2D Western blot實(shí)驗(yàn)步驟

1、2D Western blot蛋白質(zhì)樣本制備,制備的主要原則是盡可能溶解全部蛋白質(zhì),破壞蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的相互作用,避免各類干擾物質(zhì),樣品制備與IEF兼容等。

2、雙向電泳的主要步驟,第-項(xiàng)電(IEF) ,膠條平衡,第二項(xiàng)電泳SDS-APGE.

3、第二項(xiàng)電泳結(jié)束后,取出凝膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,轉(zhuǎn)膜方法可選擇濕法轉(zhuǎn)移和半干法轉(zhuǎn)移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

4、封閉, 5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4度)。

5、一抗孵育,根據(jù)抗體說明書選擇孵育時間,常規(guī)的孵育條件是室溫1小時或4度過夜,一 抗孵育后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

6、二抗孵育:根據(jù)-抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人抗兔等), 室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

7、顯影:將A、B底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進(jìn)行顯影,直到出現(xiàn)清晰的蛋白質(zhì)條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝

光時間需綜合考慮蛋白質(zhì)的.上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時間等因素。

8、定影后,清洗膠片,晾干,標(biāo)定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十余年,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

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